La purification des protéines est le processus de séparation des fractions de protéines d'un objectif spécifique des tissus, des cellules ou des mélanges de protéines. La purification des protéines doit non seulement favoriser une forte pureté de la protéine isolée, mais également maintenir l'activité biologique de la protéine. Par conséquent, il est nécessaire de concevoir un ou plusieurs schémas de purification combinés selon différentes propriétés protéiques. La principale stratégie de purification des protéines est d'exploiter les similitudes et les différences entre les différentes protéines. Sur la base de la similitude entre les protéines, le matériau non protéique peut être éliminé, puis la protéine cible peut être séparée en fonction des différences de protéines. Surtout avec le développement rapide de la technologie de génie génétique, bien que de nombreuses protéines soient exprimées par la recombinaison génétique, le niveau de purification des protéines est directement lié à la pureté et à l'activité de la protéine. Par conséquent, la purification des protéines reste un sujet important en biotechnologie moderne.
Objectif
D'une part, l'isolement et la purification des protéines sont particulièrement importants pour l'étude approfondie de la structure et de la fonction des protéines, et d'autre part, la séparation et la purification des protéines sont également directement liées à l'effet d'application des protéines. Par conséquent, la purification des protéines joue un rôle important dans la recherche et l'application de la science biologique, et la technologie de séparation des protéines et de purification est également une technologie clé de l'industrie biologique.
Le chemin
Le principe de la purification des protéines est de séparer la protéine cible avec une efficacité, un taux, un rendement et une pureté raisonnables tout en maintenant son activité biologique et son intégrité chimique. Les étapes principales comprennent la sélection de matériaux expérimentaux, le prétraitement, l'extraction des protéines, la classification des protéines brutes, la classification des protéines fines et l'identification des protéines.
Le processus de purification doit prêter attention à: 1 pour minimiser l'impact sur l'activité des protéines, comme pour éviter les effets trop élevés ou trop élevés de pH, de température élevée et de métaux lourds; 2. Fonctionner à basse température; 3. Essayez de maintenir le niveau de contenu des protéines principale dans l'échantillon.
Classification de
La purification des protéines peut être classée en fonction du type de méthode de purification:
I. Méthode de précipitation, y compris le dépôt de sel, en utilisant des ions sel pour détruire la couche solidifiée à la surface de la protéine, exposant la zone hydrophobe, puis dépôt pour atteindre le but de la purification préliminaire; Le dépôt organique, en utilisant des solvants organiques pour réduire l'activité de l'eau, détruit le film coagulé sur la surface des protéines, conduisant à des précipitations des protéines. Les précipitations sont une méthode de purification légère, mais la pureté n'est pas élevée et peut être utilisée comme processus de purification primaire.
Deux, la méthode de dialyse, y compris le sac de dialyse et la méthode d'ultrafiltration. Par dialyse et ultrafiltration, les petites impuretés moléculaires peuvent être éliminées et la solution de protéines peut également être remplacée.
3. Les méthodes chromatographiques comprennent la chromatographie sur le gel du tamis moléculaire, la chromatographie d'échange d'ions, la chromatographie d'affinité (chromatographie sur l'affinité chélatante des métaux, la chromatographie des protéines A / G, la protéine récepteur, le substrat, etc.), la chromatographie hydrophobe, la chromatographie inverse et la chromatographie liquide haute performance. Afin d'obtenir de meilleurs résultats, une combinaison de deux méthodes chromatographiques, telles que la chromatographie d'affinité et la chromatographie d'échange d'ions, est souvent nécessaire.
En plus des méthodes ci-dessus, il existe de nombreuses autres méthodes de purification, telles que la centrifugation du gradient de densité, qui conviennent à la production de protéines de haute pureté, mais nécessitent des conditions expérimentales plus élevées. Les cristaux protéiques conviennent à l'analyse de la structure biologique, telle que la transmission X.
Heure du poste: 2025-07-01