Les antigènes protéiques recombinants ont souvent plusieurs épitopes différents, dont certains sont des épitopes de séquence et certains sont des épitopes structurels. Les anticorps polyclonaux obtenus par immunisant des animaux avec des antigènes dénaturés sont des mélanges d'anticorps spécifiques aux épitopes individuels et peuvent être utilisés en général pour détecter les structures naturelles ou les protéines cibles dénaturées. Un avantage secondaire de l'utilisation de protéines dénaturées comme immunogènes est que les protéines dénaturées ont tendance à être plus immunogènes et peuvent stimuler une forte réponse immunitaire chez les animaux.
Le système d'expression d'Escherichia coli est généralement choisi à des fins antigéniques car c'est le système le plus coûteux en termes de temps et d'argent. Afin d'améliorer la possibilité de l'expression de la protéine cible et de la commodité de la purification, parfois seul un petit fragment de la protéine cible, comme un domaine spécifique, est exprimé.
La structure tridimensionnelle des protéines
Le domaine spécifique d'une protéine
Si le but de la préparation des anticorps est uniquement pour la détection de WB, il est économique et rapide d'utiliser un petit peptide synthétique comme antigène, mais il existe un risque d'immunogénicité ou de non-régénicité faible en raison d'une sélection inappropriée du segment du peptide. Étant donné que la préparation des anticorps nécessite une longue période, deux ou trois segments de peptides différents sont souvent sélectionnés pour préparer des anticorps utilisant l'antigène polypeptidique pour assurer le taux de réussite de l'expérience.
La pureté de l'antigène polypeptidique pour l'immunisation doit être supérieure à 80%. Bien qu'une pureté plus élevée puisse théoriquement obtenir des anticorps avec une meilleure spécificité, dans la pratique, les animaux produisent toujours un grand nombre d'anticorps non spécifiques, masquant ainsi les avantages de la pureté de l'antigène.
De plus, la préparation des anticorps de petits peptides doit être réticulée à l'antigène porteur approprié pour améliorer son immunogénicité. Deux porteurs antigéniques communs sont KLH et BSA.
Heure du poste: 2025-07-03