En tant qu'instrument de haute précision, la HPLC peut facilement entraîner de petits problèmes gênants si elle n'est pas utilisée correctement pendant son utilisation.L’un des problèmes les plus courants est le problème de compression des colonnes.Comment dépanner rapidement un chromatographe défectueux.Le système HPLC se compose principalement d'un flacon réservoir, d'une pompe, d'un injecteur, d'une colonne, d'une chambre de température de colonne, d'un détecteur et d'un système de traitement de données.Pour l’ensemble du système, les piliers, les pompes et les détecteurs sont les composants clés et les principaux emplacements sujets aux problèmes.
La clé de la pression dans la colonne est la zone qui nécessite une attention particulière lors de l’utilisation de la HPLC.La stabilité de la pression de la colonne est étroitement liée à la forme du pic chromatographique, à l’efficacité de la colonne, à l’efficacité de la séparation et au temps de rétention.La stabilité de la pression de la colonne ne signifie pas que la valeur de la pression est stable à une valeur stable, mais plutôt que la plage de fluctuation de la pression se situe entre 345 kPa ou 50 PSI (permettant l'utilisation d'une élution par gradient lorsque la pression de la colonne est stable et change lentement).Une pression trop élevée ou trop basse est un problème de pression de colonne.
Les plus sujets aux pannes HPLC et aux solutions
1, la haute pression est le problème le plus courant lors de l’utilisation de la HPLC.Cela signifie une augmentation soudaine de la pression.En général, il existe les raisons suivantes : (1) En général, cela est dû à un blocage du canal d'écoulement.À ce stade, nous devrions l’examiner par morceaux.un.Tout d’abord, coupez l’entrée de la pompe à vide.À ce stade, le tube PEEK a été rempli de liquide de sorte que le tube PEEK soit plus petit que la bouteille de solvant pour voir si le liquide coulait à volonté.Si le liquide ne coule pas ou s'égoutte lentement, la tête du filtre à solvant est bloquée.Traitement : Tremper dans de l'acide nitrique à 30 % pendant une demi-heure et rincer à l'eau ultra pure.Si le liquide coule de façon aléatoire, la tête du filtre à solvant est normale et est en cours de vérification ;b.Ouvrir la vanne de Purge pour que la phase mobile ne traverse pas la colonne, et si la pression ne diminue pas significativement, la tête blanche du filtre est bloquée.Traitement : Les points blancs filtrés ont été retirés et soniqués avec de l'isopropanol à 10 % pendant une demi-heure.En supposant que la pression descend en dessous de 100PSI, la tête blanche filtrée est normale et est en cours de vérification ;c.Retirez l'extrémité de sortie de la colonne, si la pression ne diminue pas, la colonne est bloquée.Traitement : S'il s'agit d'un blocage de sel tampon, rincer à 95 % jusqu'à ce que la pression soit normale.Si l'obstruction est causée par un matériau mieux conservé, un écoulement plus fort que la phase mobile actuelle doit être utilisé pour se précipiter vers une pression normale.Si la pression de nettoyage à long terme ne diminue pas selon la méthode ci-dessus, l'entrée et la sortie de la colonne peuvent au contraire être considérées comme étant connectées à l'instrument, et la colonne peut être nettoyée avec la phase mobile.À ce stade, si la pression de la colonne n'est toujours pas réduite, la plaque de tamis d'entrée de la colonne ne peut être remplacée que, mais une fois que le fonctionnement n'est pas bon, il est facile de conduire à une réduction de l'effet de la colonne, alors essayez d'en utiliser moins.Pour les problèmes difficiles, le remplacement de la colonne peut être envisagé.
(2) Réglage incorrect du débit : le débit correct peut être réinitialisé.
(3) Rapport de débit incorrect : l'indice de viscosité des différentes proportions de flux est différent et la pression du système correspondante du flux avec une viscosité plus élevée est également plus grande.Si possible, des solvants à faible viscosité peuvent être remplacés ou réinitialisés et préparés.
(4) Dérive du zéro de la pression du système : ajustez le zéro du capteur de niveau de liquide.
2, la pression est trop basse (1) et est généralement causée par une fuite du système.Que faire : recherchez chaque connexion, en particulier l'interface aux deux extrémités de la colonne, et resserrez la zone de fuite.Retirez le poteau et serrez ou tapissez le film PTFE avec la force appropriée.
(2) Le gaz entre dans la pompe, mais la pression est généralement instable à ce moment-là, haute et basse.Plus grave, la pompe ne pourra pas absorber le liquide.Méthode de traitement : ouvrez la valve de nettoyage et nettoyez à un débit de 3 à 5 ml/min.Dans le cas contraire, les bulles d’air ont été aspirées au niveau de la soupape d’échappement à l’aide d’un tube à aiguille dédié.
(3) Pas de sortie de phase mobile : vérifiez s'il y a une phase mobile dans le flacon réservoir, si l'évier est immergé dans la phase mobile et si la pompe fonctionne.
(4) La vanne de référence n'est pas fermée : la vanne de référence est fermée après décélération.Il descend généralement à 0,1.~ 0,2 ml/min après fermeture de la vanne de référence.
Résumé:
Dans cet article, seuls les problèmes courants en chromatographie liquide sont analysés.Bien entendu, dans notre application pratique, nous rencontrerons d’autres problèmes.Lors du traitement des erreurs, nous devons suivre les principes suivants : ne modifier qu'un seul facteur à la fois pour déterminer la relation entre le facteur hypothétique et le problème ;Généralement, lors du remplacement de pièces pour le dépannage, nous devons veiller à remettre en place les pièces intactes démontées pour éviter le gaspillage ;Prendre de bonnes habitudes d’enregistrement est la clé du succès de la gestion des erreurs.En conclusion, lors de l’utilisation de la HPLC, il est important de prêter attention au prétraitement des échantillons ainsi qu’au bon fonctionnement et à la maintenance de l’équipement.
Heure de publication : 18 septembre 2023