Le plus sujet aux échecs et solutions HPLC

En tant qu'instrument de haute précision, le HPLC peut facilement entraîner des petits problèmes gênants s'ils ne fonctionnent pas de la bonne manière pendant l'utilisation. L'un des problèmes les plus courants est le problème de compression des colonnes. Comment dépanner rapidement un chromatographe défectueux. Le système HPLC se compose principalement d'une bouteille de réservoir, d'une pompe, d'un injecteur, d'une colonne, d'une chambre de température de colonne, d'un détecteur et d'un système de traitement des données. Pour l'ensemble du système, les piliers, les pompes et les détecteurs sont les composants clés et les principaux emplacements qui sont sujets aux problèmes.

La clé de la pression de la colonne est la zone qui nécessite une attention particulière lors de l'utilisation de HPLC. La stabilité de la pression de la colonne est étroitement liée à la forme du pic chromatographique, à l'efficacité de la colonne, à l'efficacité de séparation et au temps de rétention. La stabilité de la pression des colonnes ne signifie pas que la valeur de pression est stable à une valeur stable, mais plutôt que la plage de fluctuation de pression se situe entre 345 kpa ou 50psi (permettant d'utiliser l'élution du gradient lorsque la pression de la colonne est stable et change lentement). Une pression trop élevée ou trop basse est un problème de pression de colonne.

Le plus sujet aux échecs et solutions HPLC

1, la haute pression est le problème le plus courant dans l'utilisation de HPLC. Cela signifie une augmentation soudaine de la pression. En général, il y a les raisons suivantes: (1) En général, cela est dû au blocage du canal d'écoulement. À ce stade, nous devons l'examiner par morceaux. un. Tout d'abord, coupez l'entrée de la pompe à vide. À ce stade, le tube PEEK était rempli de liquide de sorte que le tube PEEK était plus petit que la bouteille de solvant pour voir si le liquide dégoulinait à volonté. Si le liquide ne coule pas ou ne coule pas lentement, la tête de filtre de solvant est bloquée. Traitement: Faire tremper dans 30% d'acide nitrique pendant une demi-heure et rincer avec de l'eau ultrapure. Si le liquide coule au hasard, la tête de filtre de solvant est normale et est en cours de vérification; né Ouvrez la soupape de purge de sorte que la phase mobile ne passe pas à travers la colonne, et si la pression n'est pas considérablement réduite, la tête blanche filtrante est bloquée. Traitement: Les points blancs filtrés ont été retirés et soniqués avec 10% d'isopropanol pendant une demi-heure. En supposant que la pression tombe en dessous de 100 psi, la tête blanche filtrée est normale et est vérifiée; c. Retirez l'extrémité de sortie de la colonne, si la pression ne diminue pas, la colonne est bloquée. Traitement: S'il s'agit d'un blocage de sel tampon, rincez 95% jusqu'à ce que la pression soit normale. Si l'obstruction est causée par un matériau plus préservé, un débit plus fort que la phase mobile actuelle doit être utilisée pour se précipiter vers une pression normale. Si la pression de nettoyage à long terme ne diminue pas en fonction de la méthode ci-dessus, l'entrée et la sortie de la colonne peuvent être considérées comme connectées à l'instrument au contraire, et la colonne peut être nettoyée avec la phase mobile. À l'heure actuelle, si la pression de la colonne n'est toujours pas réduite, la plaque de tamis d'entrée de la colonne ne peut être remplacée que, mais une fois que l'opération n'est pas bonne, il est facile de conduire à la réduction de l'effet de la colonne, alors essayez d'utiliser moins. Pour des problèmes difficiles, le remplacement de la colonne peut être pris en compte.

(2) Réglage du débit incorrect: le débit correct peut être réinitialisé.

(3) Ratio d'écoulement incorrect: l'indice de viscosité de différentes proportions de flux est différent, et la pression du système correspondante du débit avec une viscosité plus élevée est également plus grande. Si possible, les solvants de viscosité inférieurs peuvent être remplacés ou réinitialisés et préparés.

(4) Pression du système Drift zéro: ajustez le zéro du capteur de niveau liquide.

2, la pression est trop faible (1) est généralement causée par la fuite du système. Que faire: trouver chaque connexion, en particulier l'interface aux deux extrémités de la colonne et resserrer la zone de fuite. Retirez le poteau et serrez ou tapissez le film PTFE avec une force appropriée.

(2) Le gaz pénètre dans la pompe, mais la pression est généralement instable à ce moment, haut et bas. Plus sérieusement, la pompe ne pourra pas absorber le liquide. Méthode de traitement: ouvrez la soupape de nettoyage et nettoyez à un débit de 3 ~ 5 ml / min. Sinon, les bulles d'air ont été aspirées à la soupape d'échappement à l'aide d'un tube à aiguille dédié.

(3) Aucune sortie de phase mobile: vérifiez s'il y a une phase mobile dans la bouteille du réservoir, si l'évier est immergé dans la phase mobile et si la pompe fonctionne.

(4) La soupape de référence n'est pas fermée: la soupape de référence est fermée après décélération. Il descend généralement à 0,1. ~ 0,2 ml / min après la fermeture de la vanne de référence.

Résumé:

Dans cet article, seuls les problèmes courants de la chromatographie liquide sont analysés. Bien sûr, dans notre application pratique, nous rencontrerons plus d'autres problèmes. Dans la manipulation des défauts, nous devons suivre les principes suivants: ne changez qu'un facteur à la fois pour déterminer la relation entre le facteur hypothétique et le problème; Généralement, lors du remplacement des pièces pour le dépannage, nous devons prêter attention à remettre en place les pièces intactes démantelées pour éviter les déchets; Former une bonne habitude record est la clé du succès de la manipulation des failles. En conclusion, lors de l'utilisation de HPLC, il est important de prêter attention aux échantillons de prétraitement et à un bon fonctionnement et à l'entretien de l'équipement.