En recherche biologique, on utilise généralement des polypeptides à séquence longue.Pour les peptides ayant plus de 60 acides aminés dans la séquence, l’expression génique et la SDS-PAGE sont généralement utilisées pour les obtenir.Cependant, cette méthode prend beaucoup de temps et l'effet final de séparation du produit n'est pas bon.
Défis et solutions pour la synthèse peptidique longue
Dans la synthèse de peptides longs, nous sommes toujours confrontés à un problème, c'est-à-dire que l'encombrement stérique de la réaction de condensation augmente avec l'augmentation de la séquence dans la synthèse, et le temps de réaction doit être ajusté pour que la réaction soit complète.Cependant, plus le temps de réaction est long, plus les effets secondaires sont nombreux et plus une partie du peptide cible est formée.De tels résidus – chaînes peptidiques déficientes – sont des impuretés clés produites dans la synthèse peptidique longue.Par conséquent, dans la synthèse de peptides longs, le problème clé que nous devons surmonter est d'explorer les conditions de réaction et les méthodes de réaction de haute qualité, afin de rendre la réaction de condensation des acides aminés plus complète et plus complète.De plus, réduisez le temps de réaction, car plus le temps de réaction est long, plus les réactions secondaires sont incontrôlables, plus les sous-produits sont complexes.Ainsi, les trois points suivants sont résumés :
La synthèse micro-onde peut être utilisée : Pour certains acides aminés rencontrés dans le processus de synthèse et qui ne sont pas faciles à intégrer, la synthèse par micro-ondes peut être utilisée.Cette méthode donne des résultats remarquables, réduit considérablement le temps de réaction et réduit la formation de deux sous-produits clés.
La méthode de synthèse de fragments peut être utilisée: Lorsque certains peptides sont difficiles à synthétiser par les méthodes de synthèse courantes et pas faciles à purifier, nous pouvons adopter la condensation complète de plusieurs acides aminés dans un certain segment du peptide dans la chaîne peptidique dans son ensemble.Cette méthode peut également résoudre de nombreux problèmes de synthèse.
La synthèse d'acylhydrazide peut être utilisée: La synthèse d'acylhydrazide de peptides est une méthode de synthèse en phase solide du peptide Cys N-terminal et de la réaction chimique sélective de l'hydrazide polypeptide C-terminal entre la formation de liaisons amide pour obtenir une méthode de liaison peptidique.Basée sur la position de Cys dans la chaîne peptidique, cette méthode divise la chaîne peptidique entière en plusieurs séquences et les synthétise respectivement.Enfin, le peptide cible est obtenu par réaction de condensation en phase liquide.Cette méthode réduit non seulement considérablement le temps de synthèse des peptides longs, mais augmente également considérablement la pureté du produit final.
Longue purification peptidique
La particularité des peptides longs conduit inévitablement à des composants complexes de peptides bruts.Par conséquent, purifier de longs peptides par HPLC constitue également un défi.série amyloïde de processus de purification de polypeptides, absorbant beaucoup d'expérience et utilisée avec succès dans la purification de peptides longs.En adoptant de nouveaux équipements, en mélangeant plusieurs systèmes de purification, en séparant de manière répétée et en utilisant d'autres méthodes expérimentales, le taux de réussite de la longue purification peptidique a été grandement amélioré.
Heure de publication : 18 avril 2023