Transfert d'énergie de résonance de fluorescence (FRET)
Le transfert d'énergie de résonance de fluorescence (FRET) est un processus de transfert d'énergie non radiatif dans lequel l'énergie de l'état excité des donneurs est transférée à l'état excité d'accepteur par l'interaction des couples électriques intermoléculaires. Ce processus n'implique pas de photons et n'est donc pas radiatif. Ce test a les avantages d'être rapide, sensible et simple.
Le colorant utilisé dans le test FRET peut être identique. Mais dans la plupart des applications, différents colorants sont réellement utilisés. En bref, le transfert de l'énergie de résonance lumineuse est le transfert d'une paire de dipôles du donneur (colorant 1) à l'accepteur (colorant 2) lorsque le groupe donneur est excité. En général, le spectre d'émission du groupe de fluorophore donneur chevauche le spectre d'absorption du groupe accepteur. «Lorsque la distance entre les deux fluorophores est appropriée (10 - 100 a), le transfert d'énergie de fluorophore du donneur à l'accepteur peut être observé.» La méthode de transfert d'énergie dépend de la structure chimique du récepteur:
1. Est converti en vibration moléculaire, c'est-à-dire que la lumière lumineuse du transfert d'énergie disparaît. (Le récepteur est un exhabitation léger)
2. L'émission est plus intense que le récepteur lui-même, entraînant un décalage vers le rouge dans le spectre de fluorescence secondaire. » (Les récepteurs sont des émetteurs lumineux).
Le groupe donneur (EDANS) et le gène accepteur (dabcyl) sont uniformément liés au substrat naturel de la protéase du VIH, et lorsque le substrat n'est pas déconnecté, le dabcyl peut Quenle Edans puis devenir indétectable en fluor. Lors de la déconnexion de la protéase du VIH-1, les edans ne sont plus éteintes par le dabcyl et les edans luciférases peuvent par la suite être détectées. La disponibilité des inhibiteurs de la protéase peut être surveillée par des changements dans l'intensité de fluorescence des EDANS.
Les peptides FRET sont des outils pratiques pour étudier la non-spécificité de la peptidase. Étant donné que son processus de réaction peut être surveillé en continu, il fournit une méthode pratique pour détecter l'activité enzymatique. L'éclat produit après l'hydrolyse des liaisons peptidiques par le donneur / accepteur fournit une mesure de l'activité enzymatique aux concentrations nanomolaires. Lorsque le peptide FRET est intact, il montre une disparition soudaine du flash interne, mais lorsqu'une liaison peptidique en face du donneur / accepteur se casse, il libère un flash, qui peut être détecté en continu et que l'activité enzymatique peut ensuite être quantifiée.
Heure du poste: 2025-07-02